NY∕T 3032-2016 草莓脱毒种苗生产技术规程(农业)
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ID： |
B4AF4A66430B4D2AB7BA8F697E7DCD37 |
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文件大小(MB)： |
0.47 |
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页数： |
7 |
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日期： |
2021-12-23 |
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ICS 67.080.10,B 31 NY,中华人民共和国农业行业标准,NY/T 3032一2016,草莓脱毒种苗生产技术规程,Technical code for the production of virus-free strawberry stock,2016-12 - 23 发布2017-04-01 实施,中华人民共和国农业部发布,目。昌,本标准按照GBj T 1. 1-2009 给出的规则起草,本标准由中华人民共和国农业部提出,本标准由全国果品标准化技术委员会(SACj TC 5 1 0) 归口,NYj T 3032-2016,本标准起草单位:沈阳农业大学、北京市农林科学院林业果树研究所、湖北省农业科学院经济作物,研究所,本标准主要起草人: 张志宏、刘月学、张运涛、顾玉成、代红艳、常琳琳、李贺、王桂霞、向发云、马跃、,韩永超,I,NY/ T 3032-2016,草莓脱毒种苗生产技术规程,1 范围,本标准规定了草莓茎尖培养脱毒方法、脱毒种苗保存与繁殖、检测病毒种类和RT- PCR 检测方法,本标准适用于草莓脱毒种苗的培育及草莓活体材料中病毒的检测,2 术语和定义,下列术语和定义适用于本文件,2. 1,茎尖培养脱毒virus elimination by shωt tip culture,取O . 2 mm~O. 5 mm 的茎尖，经组织培养获得无病毒植株的过程,2. 2,脱毒原原种苗br时er' s virus-free stock,通过茎尖培养获得的不携带草莓镶脉病毒、草莓轻型黄边病毒、草莓斑驳病毒且未经过组培增殖的,元病毒原始植株,2. 3,脱毒原种苗original virus-free stock,脱毒原原种茵通过匍匍茎繁殖方式繁育出的无病毒植株,2. 4,脱毒种苗virus-free stock,脱毒原种苗通过匍匍茎繁殖方式繁育出的元病毒植株,3 茎尖培养脱毒方法,3. 1 茎尖剥离及接种,田间选择表现品种特性的健壮植株并做标记,在匍匍茎发生初期，采集长约2cm 的匍甸茎顶端， 在超净工作台上去掉外层苞叶，用70 % 乙醇表面,消毒305 ，然后用2 % 的次氯酸锅溶液消毒10 mi n. 再用元菌蒸馆水冲洗3 遍。逐层剥去匍甸茎顶端上,的叶原基，用元菌刀片切取O. 2 mm~O. 5 mm 大小的茎尖，接种在分化培养基上(培养基配方参见附,录A) ,将接种后的培养瓶置于(23 士2)OC 、光照强度约24001x 、每天光照时间14 h~16 h 的培养室中进行,培养,3. 2 茎尖分化成苗,茎尖培养2 个月后，分化成带有叶原基的小芽，将小芽转接到新鲜的分化培养基上继续培养,当小芽长出叶片后， 将带有叶片的小芽转移到成苗培养基上(培养基配方参见附录A) ，大约培养2,个月后分化成苗丛,对苗丛进行编号，然后从苗丛上剪取叶片进行病毒检测，淘汰感染病毒的苗丛， 保留无病毒苗丛,3. 3 生根和移栽,从脱毒苗丛上剪取株高在2cm 以上的试管苗，将试管苗基部的小芽切除， 然后接种在生根培养基,中(培养基配方参见附录A) 。在组培室中生根培养30 d ~ 40 d 后，将培养容器置于覆盖100 目纱网的,NY/ T 3032-2016,温室中，炼茵l 周,炼苗后，用慑子从培养容器中取出生根的试管苗，清除试管苗根部附着的培养基，然后栽人盛有营,养基质的50 孔六盘中，浇透水。营养基质配制方法:将草炭、蛙石、细土、腐熟的牛粪按照5 : 2 : 2 : 1,(体积比)的比例混合，按1 kg/ m3 加入氮磷饵(20-5-10) 复合肥，混匀， 过筛，高温蒸汽消毒，备用,在穴盘上方搭建塑料小拱棚，塑料薄膜上加盖遮阳网。温度控制在10 0C ~ 280C 。移栽后第1 周,空气相对湿度控制在90 % 以上;移栽后第2 周~第6 周，空气相对湿度控制在80 % 以上。通过打开小,拱棚上的薄膜来降低小拱棚中的湿度。移栽6 周后撤除小拱上的薄膜。移栽8 周后试管苗生长发育成,为可以定植的脱毒原原种苗,4 脱毒原原种苗的保存,脱毒原原种苗在网室,并更换工作服。将,器长1m 、宽60 cm 、,在开花结果期,于容,洗植,前栽,室,网中,人器,进容,口贝,人,作‘,10 cm 的,10 km 以上的,酸钙30 kg ,株，在,莓生产园,5 m3 、过磷,苗作为母,7 病毒检测,7. 1 检测病毒种,包括草莓镶,7. 2 检测方法,RNA 提取方法参见附录,7. 3 检测时期和取样部位,试管苗和田间苗均可进行病毒检测。设置3 次生物学重复,7. 4 检测结果判定,将RT- PCR 产物在1. 5 %琼脂糖凝胶中电泳，电泳结束后置于凝胶成像仪中观察拍照。凝胶电泳,模式图参见附录C ,检测时设阳性、阴性植株对照，阳性对照植株应扩增出预期大小的单一目的条带，而阴性对照植株,扩不出任何条带。如果样品扩增出与阳性对照位置相同的目的条带，则检测结果呈阳性，即判定该样品,携带病毒。如果样品未扩增出目的条带，则检测结果呈阴性，应进行复检; 如果复检结果仍呈阴性，则判,定该样品为元病毒苗,2,A. 1 培养基基本成分,如元特殊说明，本标,基本培养基各,好后置4 0C 冰,制备培养,沉淀， 则应,A. 2.1,A. 2. 2,附录A,(资料性附录),培养基配方,NY / T 3032-2016,溶剂溶解后蒸馆水定容， 配,不超过4 个月，如发现,(6 g/ L ~7 g/ L),2 mg/ L. 用琼脂,1 mg/ L.用琼脂,3,NY / T 3032-2016,附录B,(资料性附录),RNA 提取方法,B……
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